(Průtoková cytometrie, FCM) je buněčný analyzátor, který měří intenzitu fluorescence obarvených buněčných markerů. Jedná se o high-tech technologie vyvinutá na základě analýzy a třídění jednotlivých buněk. Může rychle měřit a klasifikovat velikost, vnitřní strukturu, DNA, RNA, proteiny, antigeny a další fyzikální nebo chemické vlastnosti buněk a může být založena na sběru těchto klasifikací.
Průtokový cytometr se skládá hlavně z následujících pěti částí:
1 Systém průtokové komory a tekutiky
2 Systém pro tvarování světelného světla laserového světla
3 optický systém
4 Systém elektroniky, skladování, displeje a analýzy
5 Systém třídění buněk
Mezi nimi je laserová excitace v laserovém zdroji světla a systému formování paprsku hlavním měřením fluorescenčních signálů v průtokové cytometrii. Intenzita excitačního světla a doba expozice souvisí s intenzitou fluorescenčního signálu. Laser je koherentní světelný zdroj, který může poskytovat osvětlení s vysokou intenzitou a vysokou stabilitou. Je to ideální zdroj excitačního světla pro splnění těchto požadavků.
Mezi laserovým zdrojem a průtokovou komorou existují dvě válcové čočky. Tyto čočky zaostřují laserový paprsek s kruhovým průřezem emitovaným z laserového zdroje do eliptického paprsku s menším průřezem (22 μm x 66 μm). Laserová energie v tomto eliptickém paprsku je distribuována podle normální distribuce, což zajišťuje konzistentní intenzitu osvětlení pro buňky procházející laserovou detekční oblastí. Na druhé straně se optický systém skládá z více sad čoček, dírky a filtrů, které lze zhruba rozdělit do dvou skupin: proti proudu a po proudu od tokové komory.
Optický systém před průtokovou komorou se skládá z objektivu a dírky. Hlavní funkcí čočky a dírky (obvykle dvě čočky a dírka) je zaostřit laserový paprsek s kruhovým průřezem emitovaným laserovým zdrojem do eliptického paprsku s menším průřezem. To distribuuje laserovou energii podle normální distribuce a zajišťuje konzistentní intenzitu osvětlení pro buňky v oblasti detekce laseru a minimalizuje interference z bludného světla.
Existují tři hlavní typy filtrů:
1: Filtr dlouhého průchodu (LPF) - Umožňuje projít světlo pouze s vlnovou délkou vyšší než specifická hodnota.
2: Filtr s krátkým průchodem (SPF) - Umožňuje projít světlo pouze s vlnovými délkami pod konkrétní hodnotou.
3: Filtr Bandpass (BPF) - Umožňuje projít světlo pouze v určitém rozsahu vlnových délek.
Různé kombinace filtrů mohou nasměrovat fluorescenční signály na různých vlnových délkách k jednotlivým fotomultiplinárním zkumavkám (PMT). Například filtry pro detekci zelené fluorescence (FITC) před PMT jsou LPF550 a BPF525. Filtry použité k detekci oranžově červené fluorescence (PE) před PMT jsou LPF600 a BPF575. Filtry pro detekci červené fluorescence (CY5) před PMT jsou LPF650 a BPF675.
Průtoková cytometrie se používá hlavně pro třídění buněk. S rozvojem počítačové technologie se rozvoj imunologie a vynálezu monoklonální technologie protilátek, jejích aplikací v biologii, medicíně, lékárně a dalších oborech stále více zvyšuje. Tyto aplikace zahrnují analýzu dynamiky buněk, buněčnou apoptózu, typizaci buněk, diagnostiku nádoru, analýzu účinnosti léčiva atd.
Čas příspěvku: září-21-2023
