(Flow cytometry, FCM) je buněčný analyzátor, který měří intenzitu fluorescence obarvených buněčných markerů. Jedná se o high-tech technologii vyvinutou na základě analýzy a třídění jednotlivých buněk. Dokáže rychle změřit a klasifikovat velikost, vnitřní strukturu, DNA, RNA, proteiny, antigeny a další fyzikální nebo chemické vlastnosti buněk a může být založen na sběru těchto klasifikací.
Průtokový cytometr se skládá hlavně z následujících pěti částí:
1 Průtoková komora a fluidní systém
2 Laserový zdroj světla a systém tvarování paprsku
3 Optický systém
4 Elektronický, úložný, zobrazovací a analytický systém
5 Systém třídění buněk
Mezi nimi je hlavním měřením fluorescenčních signálů v průtokové cytometrii laserová excitace ve zdroji laserového světla a systému tvorby paprsku. Intenzita excitačního světla a doba expozice souvisí s intenzitou fluorescenčního signálu. Laser je koherentní světelný zdroj, který může poskytnout osvětlení s jednou vlnovou délkou, vysokou intenzitou a vysokou stabilitou. Pro splnění těchto požadavků je to ideální zdroj budícího světla.
Mezi zdrojem laseru a průtokovou komorou jsou dvě cylindrické čočky. Tyto čočky zaostřují laserový paprsek s kruhovým průřezem emitovaný z laserového zdroje na eliptický paprsek s menším průřezem (22 μm × 66 μm). Laserová energie v tomto eliptickém paprsku je distribuována podle normální distribuce, což zajišťuje konzistentní intenzitu osvětlení pro buňky procházející oblastí laserové detekce. Na druhé straně se optický systém skládá z několika sad čoček, dírek a filtrů, které lze zhruba rozdělit do dvou skupin: před a za průtokovou komorou.
Optický systém před průtokovou komorou se skládá z čočky a dírky. Hlavní funkcí čočky a dírky (obvykle dvě čočky a dírka) je zaostřit laserový paprsek s kruhovým průřezem vyzařovaný laserovým zdrojem na eliptický paprsek s menším průřezem. To rozděluje energii laseru podle normální distribuce, což zajišťuje konzistentní intenzitu osvětlení pro buňky v celé laserové detekční oblasti a minimalizuje interferenci z rozptýleného světla.
Existují tři hlavní typy filtrů:
1: Long pass filter (LPF) – umožňuje průchod pouze světlu s vlnovými délkami vyššími, než je specifická hodnota.
2: Short-pass filtr (SPF) – umožňuje průchod pouze světlu s vlnovou délkou pod určitou hodnotou.
3: Pásmový filtr (BPF) – umožňuje průchod pouze světlu v určitém rozsahu vlnových délek.
Různé kombinace filtrů mohou směrovat fluorescenční signály o různých vlnových délkách do jednotlivých fotonásobičů (PMT). Například filtry pro detekci zelené fluorescence (FITC) před PMT jsou LPF550 a BPF525. Filtry používané k detekci oranžovo-červené fluorescence (PE) před PMT jsou LPF600 a BPF575. Filtry pro detekci červené fluorescence (CY5) před PMT jsou LPF650 a BPF675.
Průtoková cytometrie se používá především pro třídění buněk. S pokrokem výpočetní techniky, rozvojem imunologie a vynálezem technologie monoklonálních protilátek se jejich aplikace v biologii, medicíně, farmacii a dalších oborech stále více rozšiřují. Tyto aplikace zahrnují analýzu buněčné dynamiky, buněčnou apoptózu, typizaci buněk, diagnostiku nádorů, analýzu účinnosti léků atd.
Čas odeslání: 21. září 2023
